孫善家  權力敏

       
       快速衣物消毒除霉劑為雙胍類和乙醇的復方消毒液，無色透明液體，無特殊氣味，聚六亞甲基雙胍含量均值為1317mg/L，乙醇的含量為體積分數40.47%，pH值6.15。為研究該快速衣物消毒除霉劑的消毒相關性能，我們進行了實驗室理化性能、殺菌效果、毒性以及現場消毒效果觀察。現將結果作如下是介紹。
       
       1  材料與方法
       1.1 理化性能測定
       1.1.1含量測定   快速衣物消毒除霉劑中乙醇的含量測定方法按2002年版《消毒技術規范》規定的氣相色譜法進行。聚六亞甲基雙胍的含量檢測方法采用分光光度法。具體測定步驟是（1）標準曲線的準備：用標準品分別配制濃度為0.8、1.6、3.2、4.8、6.4、mg/L的聚六亞甲基胍標準液。將分光光度計波長調至545nm，測定上述不同濃度標準溶液的吸光值，并繪制標準曲線。（2）樣品液測定：用移液管吸取10ml未知濃度的聚六亞甲基胍溶液至25ml容量瓶，加1ml醋酸溶液和2.5ml指示液，以蒸餾水定容至25ml，用力振搖混勻，用分光光度計測定吸光度值。（3）計算結果：根據標準曲線，計算未知溶液的聚六亞甲基胍含量。
       1.1.2 穩定性試驗  將快速衣物消毒除霉劑密封包裝產品一式3份置于37℃溫箱內，存放90d，取儲存前后樣品用上述方法檢測乙醇含量和聚六亞甲基雙胍含量，計算下降率 。
       1.2  菌懸液制備
       試驗菌為金黃色葡萄球菌（ATCC 6538）、大腸桿菌（8099）、白色念珠菌（ATCC 10231）及銅綠假單胞菌（ATCC 15442），均由軍事醫學科學院消毒檢測中心提供。取各菌分離的典型菌落接種營養瓊脂斜面（白色念珠菌用沙堡若瓊脂），培養24h用其新鮮斜面培養物。用含1000mg/L胰蛋白胨生理鹽水稀釋液（TPS）洗下菌苔，并稀釋配制成菌懸液。試驗時，將菌懸液與含量30g/L牛血清白蛋白溶液作對倍稀釋，使回收菌數達1×107~5×107cfu/ml。
       1.3  中和劑鑒定試驗 
       試驗菌為金黃色葡萄球菌、銅綠假單胞菌和白色念珠菌，試驗設平行6組，按照懸液定量殺菌試驗程序進行中和劑鑒定試驗。結果，第1組無菌生長或有少量菌，第2組長菌數超過100cfu/ml，第3、4、5組的組間誤差率不超過15%，第6組無菌生長。連續3次重復試驗結果一致，為所選中和劑及其濃度適宜。
       1.4  懸液定量殺菌試驗
       將試驗濃度的快速衣物消毒除霉劑4.0ml分裝到無菌試管中（陽性對照為TPS），置20℃水浴恒溫，加入1.0ml試驗菌懸液，作用至規定時間。取出0.5ml樣液加到4.5ml中和劑試管內，混勻。中和作用10min，取該液進行活菌計數，計算殺滅對數值。試驗至少重復3次。
       1.5  能量試驗
       將快速衣物消毒除霉劑用硬水稀釋成A（1.5x）、B（x）、C（0.5x）等3個濃度的藥液進行檢測。試驗方法與結果判定均按照2002年版《消毒技術規范》能量試驗的規定進行。
       1.6  現場消毒試驗
       隨機選擇30名工作人員為志愿者，消毒前用無菌棉拭沾濕采樣液分別在手指、前臂皮膚部位按規定面積作涂抹采樣，將采樣棉拭投入采樣管內，作為陽性對照。然后用快速衣物消毒除霉劑原液對另一側用棉拭沾濕消毒液作擦拭消毒并作用1.0min（前臂皮膚擦拭消毒作用3.0min）。用無菌棉拭沾濕含中和劑的采樣液按上述方法作涂抹采樣，將采樣棉拭采樣端剪入含中和劑的采樣液試管中，作為消毒后試驗組。將各組采樣管經充分振蕩洗脫，取洗脫液作用活菌計數，計算自然菌減少對數值。
       1.7  毒性試驗
       1.7.1  急性經口毒性試驗  采用一次最大限度試驗。選擇體重150gSD級大鼠20只，雌雄各半。染毒前，禁食過夜，不限制飲水。設劑量為5000mg/kg（體重），以2.0ml/100g（體重）用量一次性灌胃給藥。灌胃后每天觀察動物的中毒表現及死亡情況，連續觀察14d，計算LD50值。
       1.7.2  小鼠骨髓嗜多染紅細胞微核試驗  選擇ICR小鼠50只，分為5組，每組10只，雌雄各半。受試物以該消毒液原液為原形，設計5000、2000、500 mg/kg（體重）等3個劑量組，陽性對照組用40 mg/kg（體重）的環磷酰胺，陰性對照為蒸餾水。動物采用經口灌胃30h染毒法，間隔24h給小鼠灌胃2次，每次灌胃量為0.2ml/10g（體重）。末次給樣品后6h頸椎脫臼處死動物，取胸骨骨髓用小牛血清稀釋涂片，甲醇固定，Giemsa染色。在光學顯微鏡下，每只動物計數1000個嗜多染紅細胞，觀察含有微核的嗜多染紅細胞數，計算微核率（以千分率計），按Poisson分布統計處理；計數200個嗜多染紅細胞，計算嗜多染紅細胞與成熟紅細胞的比例（PCE/NCE）。
       1.7.3  多次完整皮膚刺激試驗  選擇日本大耳白兔3只，試驗前24h，將家兔背部脊柱兩側的毛剪掉，去毛范圍左、右各約3cm×3cm。次日取該消毒液原液0.5ml直接涂抹于家兔左側2.5cm×2.5cm面積皮膚上，另一側涂生理鹽水作為對照。在涂抹后4h，用水清除殘留受試物，每天涂抹一次，連續涂抹14d。在每次涂抹后24h觀察結果，進行刺激反應評分和刺激強度評價。
       1.7.4  亞急性毒性試驗  選擇體重150～180g的SD大鼠40只，隨機分為4組，每組10只，雌雄各半。根據小鼠經口毒性LD50值，設計40、200、1000mg/kg（體重）等3個劑量組，以蒸餾水作為陰性對照組。采用灌胃給藥，灌胃量為1.0ml/100g（體重），每天灌胃1次，連續30d。試驗期間每天觀察動物的中毒癥狀與臨床表現及活動情況，每周稱一次體重。末次染毒24h后，摘眼球采血檢測血液常規和血液生化指標。血液常規檢測血紅蛋白（Hb）、紅細胞壓積（HCT），進行紅細胞（RBC）、白細胞（WBC）、血小板（PLT）計數及WBC分類。血液生化指標用OLYMPUSAU400全自動生化分析儀測定總蛋白（TP）、白蛋白（ALB）、肌酐（Cr）、尿素氮（BUN）、谷丙轉氨酶（ALT）。谷草轉氨酶（AST）、膽固醇（CHOL）、甘油三酯（TG）和血糖（GLU）。頸椎脫臼處死動物作大體解剖，稱肝、腎、脾、心、肺、睪丸、卵巢重量，計算臟/體比值，取肝、腎、脾、胃、十二指腸、睪丸、卵巢、腦作病理切片檢查。

       2  結果
       2.1  理化性能檢測結果  
       檢測結果表明， 快速衣物消毒除霉劑原液乙醇含量均值3個批次樣品分別為體積分數40.8%、39.9%.40.7%，總平均含量為體積分數為40.47%。聚六亞甲基雙胍含量均值分別為1320、1331、1300mg/L，總平均含量為1317mg/L。穩定性試驗結果表明，將快速衣物消毒除霉劑密封包裝置37℃溫箱儲存90d，其乙醇下降率均值為0.23%；聚六亞甲基雙胍下降率均值為0.67%
       2.2  中和劑鑒定試驗  
       試驗證明，用含6g/L硫代硫酸鈉、2.5g/L亞硫酸鈉、50g/L吐溫80和7g/L卵磷脂的稀釋液作為中和劑，能有效中和快速衣物消毒除霉劑原液對金黃色葡萄球菌、銅綠假單胞菌和白色念珠菌的殘留作用，且中和劑及其產物對培養基和實驗菌均無影響（表1）。

      表1     快速衣物消毒除霉劑中和劑鑒定試驗結果

      組別                                  各組平均回收菌數（cfu/ml）
                       金黃色葡萄球菌          銅綠假單胞菌          白色念珠菌

1                        0                             0                            0
2                        81                           79                          63
3                        33 600 000             16 800 000            3 840 000
4                        35 700 000             23 900 000            3 420 000
5                        34 500 000             22 400 000            2 830 000
6                        0                             0                            0

 2.3  懸液定量殺菌試驗
       結果表明， 快速衣物消毒除霉劑原液對懸液內金黃色葡萄球菌、銅綠假單胞菌、大腸桿菌、白色念珠菌作用0.5min，每次試驗平均殺滅對數值均大于5.00（表2）。
       2.4  能量試驗結果
       3次重復試驗證明，該快速衣物消毒除霉劑的最低合格濃度為體積分數20%，折合聚六亞甲基胍343mg/L和乙醇11%。
       2.5  現場消毒試驗結果
       手和皮膚各經30人次試驗證明，用該快速衣物消毒除霉劑原液對手擦拭消毒作用1.0min、對前臂皮膚擦拭消毒作用3.0min，可消除皮膚上自然菌達到1個對數值以上。
       2.6  毒性試驗結果
       2.6.1  急性經口毒性試驗結果  該 快速衣物消毒除霉劑原液灌胃給藥后，觀察期間試驗動物未見明顯中毒癥狀，無動物死亡。觀察期滿處死全部動物，進行大體解剖觀察，未見肝、腎、脾、胃、腸、心肺等臟器有肉眼可見的病理改變。雌雄動物LD50值均﹥5000mg/kg（體重），屬于無毒級物質。

表2     快速衣物消毒除霉劑懸液定量殺菌試驗結果

試驗菌            對照組回收菌數對數值           作用不同時間（min）的殺滅對數值

                                        0.5             1.0             1.5

金黃色葡萄球菌            6.83                             5.62            6.82            6.83
                                     6.82                             5.64            6.82            6.82
                                     6.87                             5.26            6.87            6.87
銅綠假單胞菌                6.62                             4.92            6.62            6.62
                                     6.66                             4.88            6.66            6.66
                                     6.69                             4.88            6.69            6.69
大腸桿菌                       7.34                             5.28            7.34            7.34
                                     7.25                             5.32            7.25            7.25
                                     7.21                             5.36            7.21            7.21
白色念珠菌                   7.08                             7.08            7.08            7.08
                                     7.22                             7.22            7.22            7.22
                                     7.04                             7.04            7.04            7.04
 

      2.6.2  小鼠骨髓嗜多染紅細胞微核試驗結果  各劑量組微核率與陰性對照組比較差異無顯著性，而環磷酰胺組與陰性對照組比較差異有高度顯著性（P﹤0.01），各組PCE/NCE比值均在正常范圍內。 快速衣物消毒除霉劑對雌雄小鼠骨髓嗜多染紅細胞微核試驗結果為陰性（表3）。

       表3   快速衣物消毒除霉劑小鼠骨髓嗜多染紅細胞微核試驗結果

       劑量組                       微核率                                      PCE/NCE

     （mg/kg•bw）   受檢     含微核   微核率（‰）     受檢    NCE     PCE/NCE    
                        PCE數   PCE數 （x±s）              PCE數            （x±s）

5000                 5000       7         1.3±0.5            1000     899      1.118±0.032
2000                 5000       8         1.5±0.5            1000     895      1.113±0.032
500                   5000       7         1.4±0.5            1000     897      1.116±0.020
0                       5000       7         1.3±0.5            1000     892      1.112±0.021
40(cp)               5000      128      24.6±5.0          1000    1087     0.913±0.021

注：標內“cp”代表陽性對照組環磷酰胺；每組試驗雌雄動物各5只。

      
       2.6.3  亞急性毒性試驗結果  試驗期間，各劑量組試驗動物體重、增重與對照組比較無顯著性差異（P＞0.05）。對大鼠的血常規、血生化各項指標未見明顯改變。對各劑量組動物作大體解剖檢查時，未發現明顯病變；病理切片檢查結果未見與樣品有關的病理改變。
       2.6.4  一次完整皮膚刺激試驗結果  結果表明，該快速衣物消毒除霉劑原液擦拭皮膚，對白色家兔多次皮膚刺激試驗，評分積分為0，結果判定為無刺激性。

       3  討論
       近年來，衣物和織物的消毒除霉問題受到消毒界專家和老百姓的關注，聚本研究快速衣物消毒除霉劑含聚六亞甲基胍1300mg/L和體積分數40%乙醇，其使用濃度低于一般文獻報道，但試驗證明其對細菌繁殖體和白色念珠菌有良好的殺滅效果[1～3]。用聚六亞甲基雙胍與乙醇的復方制成快速衣物消毒除霉劑對其消毒除霉劑的功效，穩定性和毒性試驗進行全面檢測尚未見報道。試驗結果無毒，對皮膚無刺激，微核試驗陰性，亞急性毒性試驗符合規范的要求。該快速衣物消毒除霉劑殺菌效果好，性能穩定，可廣泛應用于衣物、織物的消毒。

   (孫善家系青島潔神投資集團有限公司董事長    權力敏系山東省青島市疾病預防控制中心專家)